利来国际人结肠腺癌细胞LS1034培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640+10%FBS+1%P/S

传代方法：建议初次传代比例为1:2

传代情况：每2天换液一次

备注：使用无菌离心管收集瓶内培养基，以便进行对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接选购利来国际的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待其处于良好状态时，灌满完全培养液并封闭瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内严格进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2培养箱静置3-4小时以稳定细胞状态，之后进行处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并记录不同倍数的照片（建议拍摄40x, 100x, 200x三个倍率），前三天的照片是重要的售后依据。如果未提供照片，将默认收到的细胞状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后适度松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，收集瓶中的完全培养液至离心管中，留5ml培养基于37℃、5%CO2培养箱中培养。如果细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清液，并用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次洗涤。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞变化，如果大部分细胞变圆并脱落，迅速进行下一步。
3. 轻拍培养瓶后加入5ml以上完全培养基，终止消化。轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代至两个T25瓶中，补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS洗涤一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞情况，待细胞回缩后添加5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落。
3. 将悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
4. 弃去上清液，加入1ml 利来国际无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后续转入液氮罐，请先在-80℃冰箱放置24小时以上后再转入。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护设备），迅速放置于37℃水浴中解冻，直至管内无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞贴壁不牢，运输过程中可能会出现细胞脱落，这是正常现象。如脱落较多，收集培养液至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清液进行过渡培养（后期对比培养），沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后消化1-2分钟，截止反应后再次离心，重复前述操作，最后按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况及判定标准

1. 细胞在运输过程中遭遇损失、瓶身破损、培养液严重泄漏等情况，将进行重发。
2. 如细胞受到污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重新发货。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，若大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可进行重发。
4. 如干冰运输的细胞在复苏24小时内出现污染，可进行重发。
5. 细胞活性问题需在收到后7天内提供真实实验结果，采用台盼蓝染色法测试细胞活力，核实后可重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，若在3天内未告知问题，则视作产品合格。4-7天内出现问题需提供前3天的照片及相关操作步骤，并与技术人员沟通，由技术人员进行责任判定，合格的将予以重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染不予重发。
2. 客户错误操作导致细胞状态不佳不予重发。
3. 非本库推荐的细胞培养体系造成的细胞问题不予重发。
4. 未提供培养前3天的照片，细胞状态不良不予重发。
5. 细胞在培养时经过其他处理的不予重发。
6. 收到细胞后2天内未告知问题的不予重发。
7. 依据具体情况而定。