在生命科学与医学研究领域，类器官已成为备受关注的“明星模型”，在疾病机制探索、药物筛选和精准医疗等方向表现出色。然而，许多科研工作者在类器官培养中常常遇到“无法形成结构”、“细胞活性不足”及“传代失败”等挑战。分析其原因，细胞因子的选择与配比可能是成败的关键所在！接下来，我们将结合类器官经典培养方案WENR（Wnt3a、EGF、Noggin、R-Spondins），详细解析这“四大护法”如何发挥各自的优势，帮助您成功克服类器官培养的困难。

WENR方案的经典地位

WENR（或称WNER）方案由荷兰Hubrecht研究所的Hans Clevers团队首次开发，其核心成分包括Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins。这四种成分被视为类器官培养的“保护神”。WENR方案在实际应用中不断演化，与其他细胞因子或小分子抑制剂巧妙结合，衍生出多种适用于不同类器官构建的培养条件。目前，该方案已广泛应用于胃、小肠、结肠、胰腺及肝脏等类器官的培养。

WENR“四大护法”功能解析

1. Wnt-3a：干细胞增殖的“发动机”

Wnt-3a作为经典Wnt通路的激活剂，能够稳定β-catenin蛋白，启动下游靶基因（如c-Myc、CyclinD1），在细胞发育、增殖及分化中发挥重要作用。研究表明，无论源自何种成体干细胞，其衍生的类器官在增殖、干性维持及终末分化等环节均依赖于Wnt信号通路。在小鼠结肠类器官生成过程中，外源性Wnt-3a的加入对于其增殖至关重要，缺少Wnt-3a的类器官无法存活超过三天。

2. EGF：细胞增殖的“加速器”

表皮生长因子（EGF）通过与受体结合，激活MAPK/ERK通路，促进细胞的增殖和存活。EGF能够刺激上皮细胞增殖、血管生成和表皮细胞的分化，从而推动类器官三维结构的形成。EGF广泛应用于多个类器官的培养中，尽管它并非必需因子，但能够显著增加类器官的体积。

3. Noggin：抑制分化的“守门员”

Noggin作为骨形态发生蛋白（BMP）的内源性抑制剂，通过阻断BMP与受体的结合，促进干细胞增殖，为类器官的形成提供充足细胞。Noggin不仅抑制BMP信号通路，还调控细胞的分化过程。在类器官培养中，通常与Wnt-3a和R-Spondins共同使用，以促进生长和分化。

4. R-Spondins：Wnt信号的“放大器”

R-spondin通过与Frizzled和LRP5/6受体结合，增强Wnt信号的表达，以促进干细胞的增殖及类器官结构的形成。研究表明，缺少R-spondin时，类器官的生长会停滞。此外，R-spondin的浓度对类器官的生长状态有明显影响，适当选择浓度能促进更快的生长。

WENR方案使用的注意事项

在使用WENR方案时，需严格控制Wnt-3a的浓度，以避免类器官结构的紊乱。同时，R-spondin需与Wnt-3a协同使用，其单独应用效果有限。一般推荐Wnt-3a的使用浓度为50-100ng/mL，并可以根据养殖进展动态调整。此外，由于EGF易被蛋白酶降解，建议使用无血清培养基，而EGF的使用浓度通常设定为50ng/mL。实验中还应定期更换培养基，以预防细胞的异常分化。

在长期培养类器官时，Noggin与Wnt-3a的结合是关键。此外，BMP信号的过度激活会导致类器官形成囊状结构，失去功能性。因此，对于不同组织来源的类器官，可能需要特异性选择不同亚型的R-spondin。此外，Wnt-3a和R-spondin在储存时应分装并保持在-80℃以防失活。

通过以上分析，希望能为您在类器官培养的实践中提供帮助，助力您的研究取得成功！同时，记得关注利来国际以获取更多优质细胞因子资源，进一步推动您的科研进展。