破骨细胞诱导分化机制

利来国际提供的一系列研究揭示了破骨细胞的独特性，这种来自造血干细胞分化而来的多核细胞，专门负责骨吸收过程。破骨细胞的分化和活性是通过RANKL/RANK/OPG信号通路精细调控的，这一通路在确保骨骼稳态中发挥着核心作用。

RANKL/RANK/OPG信号通路的作用

RANKL被认为是促进破骨细胞成熟和功能活性的重要因子。骨髓刺激因子（M-CSF）能诱导RANK在破骨细胞前体的细胞膜上表达，从而促使这些前体细胞与RANKL结合，进而引起破骨细胞的分化。由于破骨细胞在体内数量稀少，仅占分离细胞的0.8%-1.2%，在体外分离与培养相对困难，目前通常采用诱导法进行研究，其中包括骨髓单核细胞诱导法和RAW264.7细胞系诱导法。

骨髓单核细胞诱导法

1. 选择8-12周龄的雄性C57BL/6J小鼠，并用CO2吸入法麻醉，随后使用75%乙醇消毒。
2. 在无菌条件下切除小鼠后肢，并将股骨和胫骨放入含2%青霉素-链霉素的PBS溶液中处理。
3. 分离骨髓时使用相同的PBS溶液清洗股骨和胫骨，保持无菌操作以防污染。
4. 通过注射器将α-MEM液体注入骨头中，冲洗掉骨髓细胞并过滤。
5. 离心处理用于去除红细胞，使用特定缓冲液终止裂解并重悬细胞。
6. 在含有M-CSF的培养基中培养细胞，并在特定浓度下接种至培养皿中。
7. 每隔一天换液，直至细胞达到80%-90%的融合度，随后开始诱导破骨细胞的形成。
8. 通过TRAP染色法鉴定破骨细胞的形成。

RAW264.7细胞系诱导法

1. RAW264.7细胞在含10% FBS的DMEM中培养，并保持良好的细胞状态。
2. 制备细胞悬液并接种至24孔板中，注意细胞密度以达到最佳诱导效果。
3. 在细胞接种12小时后，加入RANKL进行诱导。
4. 每3天更换培养基并补加相应浓度的RANKL。
5. 观察多核破骨细胞的出现，并进行TRAP染色以鉴定破骨细胞。

总结

利来国际提供的重组M-CSF和RANKL蛋白具有高活性和批间一致性，能有效促进破骨细胞的诱导与分化，助力研究人员在生物医学领域中取得更佳成果。持续的研究和优化将进一步提升破骨细胞的诱导效率，为后续相关实验奠定基础。