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谁说cfRNA不能长读长?利来国际带您了解前沿技术。

发布时间:2025-02-27   信息来源:毛承心

近年来,液体活检因其低侵入性和能够实现频繁或连续的样本采集而受到广泛关注。这种方法能够持续跟踪肿瘤进展及治疗反应,其中细胞外囊泡(Extracellular Vesicles, EV)成为重要的生物标志物。EV是由细胞释放的、具有脂质双分子层结构的膜泡,内含各类物质,如脂质、蛋白质和RNA,能真实反映活体细胞的状态。

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研究表明,EV中的miRNA生物标志物Panel的诊断性能普遍优于单一生物标志物,且在血浆中的诊断价值高于血清。同时,针对前列腺癌患者尿液miRNA差异表达的研究显示,十种miRNA可作为前列腺癌的早期检测工具。关于EV中的长链RNA,研究发现血液来源的EV长链RNA表达谱可以作为胰腺导管腺癌的生物标志物,有效区分健康个体与恶性肿瘤患者。

传统方法多采用短读长RNA测序进行血液中cfRNA的研究,但由于读长短,难以解析全长转录本及复杂RNA加工事件。与此相比,cfRNA中的细胞外囊泡RNA完整性更高、长度更长,采用长读长RNA测序技术能够直接对EVRNA进行全长转录本测序,发现更多新型RNA异构体,提升临床应用的效率和准确性。

近期,加州大学圣克鲁兹分校的Daniel Kim研究小组关注长读长测序的优势,希望通过这一技术进行血液EVRNA检测,验证EVRNA在疾病诊断中的潜在作用。他们发现,现有的基于DNA的液体活检方法可能错失癌症最早期的检测机会,而早期诊断有助于及时治疗,进而降低死亡率。该研究团队采用COMPLETE-seq RNA流程,经过高特异性膜亲和技术提取血浆EVRNA,并结合纳米孔长读长测序和短读长测序手段,获得EVRNA转录组的全面信息。

研究结果显示,体内重复RNA序列在血液中含量丰富,具有疾病特异性,可作为有效的诊断生物标志物。这一成果已发表在《Nature Biomedical Engineering》期刊上。研究团队通过从血浆中分离EVRNA并反转录为cDNA,采用短读长和长读长测序技术,对基因差异表达及cfRNA长度进行分析。长读长RNA测序的结果显示,胰腺癌患者体内的cfRNA远比以往研究所示更长,揭示全长、多腺苷酸化、带帽子的RNA分子的存在,为cfRNA的真正长度提供了首度识别。

研究中,健康对照和胰腺癌患者的血液样本分离为血浆,使用exoRNeasy(QIAGEN)试剂盒进行处理,再分离EVRNA,最终完成cfRNA的长读长和短读长测序。这些长读长测序数据表明,通过exoRNeasy试剂盒提取得到的EVRNA完整性较高,无降解现象。

快速、高效的细胞外囊泡RNA分离方案能够支持处理高度样本量,如最高4 mL血清/血浆,16 mL尿液等。在特异性分离EV后,研究团队能够利用QIAGEN经典的硅胶膜技术,从细胞外囊泡中高效提取高纯度的总RNA,以适应下游的mRNA、长链非编码RNA及miRNA分析。

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