在前一篇关于Western Blot实验的干货分享中，我们已经探讨了四种蛋白浓度的测定方法。本篇将针对样本制备中常见的问题进行详细讨论，并提供相应的解决方案。

问题1：蛋白浓度低

导致蛋白浓度低的原因可能有多个方面：

• 1. 细胞或组织的量偏少；
• 2. 样本与裂解液的比例不合适；
• 3. 没有充分裂解；
• 4. 蛋白浓度测定方法不合适。

为了解决这些问题，建议采取以下措施：

• 1. 增加样本量；
• 2. 根据样本的数量调整裂解液的用量，例如对于100万细胞或20mg组织，添加100-200μL裂解液；
• 3. 确保裂解时间充足，通常在低温下保持10-30分钟。对于组织样本，可以借助物理破碎，而细胞样本需进行吹打或颠倒混匀；
• 4. 选择合适的蛋白浓度测定方法。

问题2：出现透明胶状物

此现象通常是由于基因组复合物的释放导致的。解决方案包括：

• 1. 适度进行超声或使用1mL注射器反复抽吸，以打断基因组DNA，消除粘稠感；
• 2. 加入Loading buffer后适当延长煮沸的时间，这样可以充分释放结合在基因组DNA上的蛋白，并使DNA部分断裂，从而有效消除胶状物；
• 3. 在裂解时往裂解液中添加广谱核酸酶。

问题3：上清漂浮一层油脂

样本中如果富含脂肪，则可能出现上清漂浮油脂的问题。为此，可以采取以下措施：

• 1. 在裂解后，将样本低温静置，并吸出漂浮的油脂；
• 2. 如果吸取后仍未达到预期效果，可以尝试使用二氧化硅进行吸附。

通过以上方法，我们可以有效解决Western Blot实验中样本制备过程中的常见问题，从而提高实验的成功率。在生物医疗领域，专业的品牌如利来国际为科研团队提供高质量的试剂和技术支持，助力科研取得更大进展。