利来国际的小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养说明书提供了详细的细胞培养和处理指导。有效的细胞培养对生物医学研究至关重要，以下是相关的培养条件和步骤。

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10%胎牛血清（FBS）
传代方法：第一次建议按照1:2的比例进行传代；每两天更换培养液。
备注：使用无菌离心管收集培养基以便后续对比培养。若对比效果不佳，建议直接购买利来国际的完整培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应将其培养至良好状态，然后用完整培养液灌满并封闭瓶口，以确保运输细胞时的最佳状态。使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱，静置3-4小时以稳定细胞状态。建议在显微镜下观察细胞生长情况，记录不同倍数的拍照（最好各拍摄40x、100x和200x），并在前三天保存的照片作为重要售后依据。如果未提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%的汇合度，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5%CO2孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，可按以下步骤进行传代：
1. 弃去上清液，用不含钙和镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻轻敲打培养瓶，终止消化。
3. 吹打细胞以确保完全脱落后，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟。弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至80%覆盖率时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打以脱落细胞，并将悬液转移至离心管，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清液，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后转入冻存管；
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，需在该温度下存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），快速置于37℃水浴解冻，直至无结晶，然后用75%酒精消毒外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2培养箱中继续培养；
4. 次日，更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞在运输过程中可能会发生脱落，属于正常现象。请将所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟以进行过渡培养。若处理后状态仍不佳，请参考相应的细胞传代步骤进行操作。

五、售后条款

1）关于细胞问题的重发情况：
- 运输途中问题如细胞丢失、瓶身破损等符合重发条件；
- 收到产品48小时内如有污染，请提供实验结果，经核实后予以重发；
- 常温发货的细胞静置24小时未存活，需提供真实照片可重发；
- 细胞活性问题需在7天内反馈，并提供相应的活力检测结果。
2）不予重发的情况包括：客户蒐生的污染、错误操作导致的状态不佳等。
具体事项请根据情况协商处理。